Hay tres modos diferentes para la practica de la Inseminación artificial.

En este trabajo hablaremos de la Inseminación realizada con semen refrigerado y con semen congelado.

Inseminación con semen refrigerado:

La inseminación con semen refrigerado es una practica utilizada cuando las distancias entre macho y hembra son grandes. La costumbre en cinofilia es el desplazamiento de la perra al lugar de residencia del macho, esto implica a veces largos desplazamientos cuando el macho reside en el extranjero, estos desplazamientos son a menudo costosos y muy fatigosos. Esta técnica evitaría dichos desplazamientos.

Una vez que la perra entra en celo debe ser vigilada diariamente antes de entrar en la fase de estro, realizándose citologias vaginales diarias, una vez que este al final del proestro y antes de entrar en la fase de estro se debería ir informando al propietario del macho para preparar el semen.

Los propietarios del macho se pondrán en contacto con su Veterinario, el cual realizara la extracción del semen y lo preparara para su envío, esta preparación requiere de una serie de operaciones.

El Veterinario deberá realizar un fraccionamiento de las diferentes fases del eyaculado a fin de obtener una fracción epididimaria conteniendo esencialmente los espermatozoides mas puros posible, recogiendo normalmente solo las dos primeras fases del eyaculado, si no es posible dicho eyaculado se centrifuga a 1.000 revoluciones por minuto durante 5 minutos eliminando el sobrenadante para obtener un máximo de 2 ml de fracción epididimaria.

El esperma mantenido a temperatura ambiente se conserva algunas horas pero su refrigeración a + 4 ºC aumenta su fecundación durante varios días e incluso una semana, pero antes de refrigerar el eyaculado obtenido debemos de mezclarlo con un diluyente isotónico para aumentar el tiempo de vida del semen y para protegerlo contra el choque térmico y contra la acción de contaminaciones bacterianas.

El mas simple diluyente es la leche desnatada y esterilizada, a 1 volumen de la fase espermatica se le añade de 4.5 a 8 volúmenes de leche desnatada esterilizada conteniendo además 1.000 UI de penicilina y 1 mlgr de Estreptomicina por mililitro.

Esta dilucion se debe realizar inmediatamente a temperatura ambiente echando al diluyente gota a gota a fin de no exponer a los espermatozoides a un choque térmico y removiendo ligeramente el tubo, se añadirá un volumen de diluyente suficiente para el volumen final varíe entre los 3 ml (razas miniatura) a los 10 ml (razas gigantes). La mezcla es entonces refrigerada a + 4 ºC durante 45 minutos a fin de acondicionarlo para la expedición.

Esta técnica permite conservar el semen hasta una semana, aunque siempre es preferible a fin de optimizar la cubricion utilizar semen refrigerado en las 48 horas que siguen a su recolección, si la cantidad de eyaculado es grande se puede realizar una primera inseminación con la mitad y una segunda inseminación a 24 o 48 horas de la primera.

Para mandar el semen refrigerado se debe de utilizar unos tubos cerrados tipo “Hemolisis”, evitando el caucho por ser a menudo espermicida, estos tubos se introducen a su vez en un termo con buena abertura y se rellena con bolsas de algodón humedecidas con agua del refrigerador a + 4ºC enviándolo a un embalaje sólido pro correo rápido o por avión, así la mezcla enviada estará a una temperatura entre 4 a 10 ºC.

El porcentaje de fecundación utilizando semen refrigerado es idéntico al obtenido con semen fresco, oscilando entre 70 y 85% de éxito, siendo su prolificidad idéntica al del acoplamiento natural.

Inseminación con semen

La inseminación con semen congelado responde a dos objetivos, ante todo genéticos, por una parte la conservación casi ilimitada del poder fecundante del esperma en nitrógeno liquido a – 196ºC, el semen puede ser utilizado varios anos después de su recolección y su congelación.

Esta técnica permite por consiguiente:

-  Utilizar el semen de un animal si no esta disponible (fallecimiento, enfermedad, accidente etc) o si se ha sido vendido; los utilizados con la precaución de haber congelado su esperma durante su edad joven.

-  Ayudar a salvaguardar las razas caninas en vía de desaparición

-  Utilizar racionalmente un animal de valor genético conocido en un acoplamiento programado, así los cruzamientos consanguíneos entre generaciones utilizados frecuentemente en la selección canina son facilitados grandemente.

-  Favorecer los cambios internacionales particularmente en casos de barreras sanitarias.

La utilización de semen congelado es corriente en Estados Unidos aunque su porcentaje de fecundación es menor que en otros animales, esto es comprensible teniendo en cuenta que el eyaculado de un perro contiene unos 500 millones de espermatozoides de media, frente a los 4.000 para un toro y los 25.000 de un verraco y debido a su vez a la morfología del esperma canino sus diluyentes para congelación no han dado el mismo resultado que en otros animales.

Además la congelación destruye un buen numero de células y un eyaculado congelado no puede inseminar mas que a un leve numero de perras, pero a su vez nos permite diseminar largamente el potencial genético.

Principio de la congelación del semen:

La congelación del semen debe permitir realizar ulteriormente una inseminación artificial con éxito, ahora bien el esperma es un medio vivo, luego frágil y mortal y su congelación necesita de técnicas complejas, además para proteger el curso de las etapas que han de descender su temperatura en nitrógeno liquido (- 196ºC) y la recuperación brutal de temperatura en el momento de la descongelación es necesario la mezcla con diluyente apropiado.

El diluyente para congelación es un medio, bien natural bien artificial, en el cual el espermatozoide esta protegido de los cambios de temperatura y donde su fecundidad es preservada suficientemente a las bajas temperaturas de la conservación. Las propiedades ideales de un diluyente son: una isotonicidad, un poder nutritivo, un poder tampón eficaz, un poder antioxidante, una acción protectora, una actividad antibacteriana, una buena actitud a su conservación bajo una forma fácilmente utilizable.

Desde 1950 numerosos trabajos han buscado los diluyentes cuya composición han sido publicados contienen:

-  Coloides (yema de huevo a menudo y a veces la leche)

-  Azucares (clucosa, fructosa o lactosa)

-  Iones y Sustancias tampones (citrato de sodio en general y a veces bicarbonato sódico)

-  Antibióticos o sustancias antibacterianas (penicilina, dihidroestreptomicina, sulfamidas)

-  Crioprotectores (el glicerol es la sustancia mas empleada variando entre 4 al 9% del volumen final)

-  Otras sustancias como TRIS (Trihidrometilaminometano)

Estas sustancias permiten entre otras evitar el choque térmico, minimizando la formación de cristales de hielo intracelulares en el curso del enfriamiento y congelación, ellas permiten igualmente prevenir el “efecto de solución” que se produce en caso de congelación, una parte del agua del diluyente cristaliza bajo forma de agua pura, en el resto de la solución (espermatozoides mas resto de diluyente) la concentración de las disoluciones aumentan, lo que crea un aumento de agua fuera de las células.

El acondicionamiento del semen congelado se efectúa la mayor parte del tiempo en pajuelas pero ciertos centros americanos la efectúan en píldoras cuya identificación y manipulación son menos cómodas.

Una vez acondicionado el semen en pajuelas y congelado realizaremos la descongelación de dichas pajuelas al baño maria en agua tibia, los resultados de motilidad de los espermatozoides aparentemente mejoran por una descongelación a altas temperaturas (hasta + 80ºC) pero su mayor inconveniente es el contacto de la pajuela con el agua caliente siendo su manipulación mas delicada.

Por razones practicas evidentes la mayor parte descongelan en un baño maria alrededor de 37 ºC, la descongelación se obtiene en 10 minutos pero es preferible dejar las pajuelas de 45 a 60 minutos a iniciar después de la descongelación.

Sin embargo, en todos los casos, la técnica de descongelación correspondiente al modo de congelación esta precisada por el Centro de abastecimiento de las pajuelas.

Después de la descongelación las pajuelas deberán ser secadas de una a una, el inseminador verificara la identidad de cada una de ellas (el código de identificación esta dado por el centro expedidor), las dos extremidades son enseguida cortadas y su contenido echado en un tubo, si se utilizan pastillas la descongelaron se hace en un liquido apropiado expedido por el Centro expedidor.

Después de la descongelación conviene verificar la motilidad examinado una gota en le microscopio, en la especie canina y en el estado actual de nuestros conocimientos las muestras no suelen tener mas del 50% de espermatozoides móviles después de la descongelación.

El porcentaje de resultados depende de la técnica de inseminación, la inseminación intravaginal permite tener gestaciones en el 55% de los casos, la inseminación intrauterina aumenta el porcentaje hasta el 70%.

La prolijidad aparece ligeramente rebajada de un 15 a un 20%.

José Luis Pazos Boluda